Técnica de Hibridación (FISH)

En Linfoma B difuso de célula grande (LBDCG)

 La FISH utiliza fragmentos de ADN incorporados con nucleótidos acoplados a fluoróforos (sondas) para examinar la presencia o la ausencia de secuencias complementarias, para el análisis de esta técnica se uso sondas Break Apart y se necesitaron muestras de medula ósea y sangre periférica en la que se observaron los núcleos en tejidos con zona tumoral. (1)

El diagnostico y pronostico de linfoma B difuso de célula grande (LBDCG), fue el correspondiente a esta prueba y se reconoció resultados positivos: el 24% para Bcl-2, el 23% para c-MYC, el 12,5% para Bcl-6, el 8% de positividad de Bcl-2/cMYC y el 5% presentaron positividad para Bcl-2/Bcl-6. (1) (2)

A. FISH Bcl-6 negativo. Los núcleos muestran dos señales de fusión (amarilla) normal. B. FISH Bcl-2 positivo. Los núcleos muestran una señal de fusión, una verde y una roja independientes correspondientes a rearreglos de gen. C. FISH c-MYC positivo. Los núcleos muestran una señal de fusión, una verde y una roja independientes correspondientes a rearreglos de gen.

Estadísticas de prueba FISH en diversos Linfomas

Referencias Bibliográficas:

1. http://www.scielo.org.co/pdf/rcc/v23n1/0123-9015-rcc-23-01-3.pdf

2. http://www.sah.org.ar/revista/numeros/28-vol%2019-extraordinario.pdf

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en LINFOMA

Es una prueba de ADN de alta sensibilidad que puede detectar cambios genéticos y ciertos cambios cromosómicos tan pequeños que no se pueden ver con un microscopio, incluso si la muestra tiene muy pocas células de linfoma. (1)

El analisis de clonalidad mediante PCR se basa en la amplificación simultanea de todos los reordenamientos presentes en la muestra (clonales y policlonales). La detección de estos reordenamientos para el gen IgH está basada en el uso de cebadores FR que presentan un 80% de hemología con las regiones V, por ejemplo: los cebadores para la región FR2 y FR1 del segmento VH disminuye el porcentaje de falsos negativos. (1) (2)

 Estructura del gen IgH y localización de los cebadores para amplificar los reordenamientos del gen

Muchas translocaciones han sido descritas que pudieran tener utilidad diagnóstica o pronóstica en los LNH. Estas translocaciones involucran genes como Bcl-1, Bcl-2, Bcl-3, Bcl-6, AP12, PAX-5 y NPM/ALK. Las cuales pueden detectarse con PCR. (2) 

El uso de PCR en este tipo de muestras ha demostrado poder tener un importante valor adjunto en el diagnostico del Linfoma, ayudando a distinguir entre lesiones benignas y neoplásicas. (3)

Referencias Bibliográficas:

1. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892008000100002

2. https://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2015/im151m.pdf

3. https://www.cancer.org/es/cancer/linfoma-hodgkin/deteccion-diagnostico-clasificacion-por-etapas/como-se-diagnostica.html

Alteraciones de la Epigenómica en el LINFOMA

 Las alteraciones epigenéticas se consideran mecanismos independientes que participan en la aparición y progresión del cáncer. Estos mecanismos epigenómicos no implican un cambio en la secuencia de ADN, pero si tienen una importante modificación en la expresión génica. (1)

En el Linfoma, estas alteraciones corresponden principalmente a la hipermetilación de los promotores de los genes supresores tumorales, hipometilación global del DNA, junto con la sobreexpresión y actividad de las histonas-desacetilasas. En células neoplásicas, la abundancia de las histonas desacetiladas se asocia genrealmente con la hipermetilación del ADN y silenciamiento de genes. (2)

En un estudio realizado en células de manto del Linfoma se mostraba una hipometilación del ADN exclusiva en este sitio, que expresaba el oncogén SOX11, sino tambien marcas de histonas relacionadas con regiones reguladoras activas tipo enhacer, para ello se estudio la estructura tridimensional del ADN mediante la técnica de 4C-seq. (3)

Referencias bibliográficas:

1.https://www.elsevier.es/es-revista-gaceta-mexicana-oncologia-305-articulo-las-alteraciones-epigeneticas-progresion-del-X1665920114579068

2.https://www.medigraphic.com/pdfs/circir/cc-2012/cc125o.pdf

3.https://genotipia.com/genetica_medica_news/epigenoma-del-linfoma/

Alteraciones de la Traducción en el LINFOMA

La biología de las células normales y cancerosas ha estudiado a la familia de los genes MYC en Linfomas, es una de las mas ampliamente estudiadas en la biología; esta constituida por los protooncogenes c.Myc, N-Myc y L-Myc, que están íntimamente relacionadas con neoplasias de este tipo.

El gen c-Myc se compone de tres exones. El exón 1 tiene dos promotores y no codifica. Los exones 2 y 3 codifican para la proteína Myc que tiene un sitio de inicio para la traducción en el nucleótido 16 del exón 2 (20); en dicho sitio se sintetiza una proteína c-Myc de 64 kDa constituida por 439 aminoácidos y presenta una traducción alternativa que origina dos tipos de proteínas, una de secuencia larga y otra de secuencia corta, denominadas p67 Myc (67 kDa) y MycS (45 kDa). (1)(2)

Los errores en la traducción, que se asocian con el origen del Linfoma en células de manto tienen un proceso evolutivo en el que las células normales adquieren un fenotipo maligno a partir de la acumulación de diversas alteraciones genéticas y epigenéticas que afectan a protooncogenes, genes supresores de tumores y genes de reparación del ADN. (3)

Referencias Bibliográficas: 

1. http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0121-07932011000400006

2.https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0037196311000461

3. http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0212-71992007000300010

Alteraciones de la transcripción en el Linfoma

 Científicos han logrado, en gran medida, comprender mejor cómo ciertos cambios en el ADN pueden causar que los linfocitos normales se conviertan en células de linfoma. (1)

Algunas personas heredan mutaciones del ADN de uno de sus padres que aumentan sus riesgos para algunos tipos de cáncer. Tener antecedentes familiares de linfoma (linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, CLL) parecen aumentar su riesgo de linfoma.

Se sabe que el mecanismo de transcripción de esta enfermedad es el plásmido recombinante pBSEBER-1, obtenido con el procedimiento de clonación, se usó para sintetizar ARN antisentido corriente, arriba del promotor T7 (transcripción dirigida por el promotor T7). (2)(3)

Referencias Bibliográficas: 

1. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1636541012611386

2. http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-46341999000100007

3. https://www.cancer.org/es/cancer/linfoma-no-hodgkin/causas-riesgos-prevencion/que-lo-causa.html