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sábado, 27 de febrero de 2021

Técnicas de edición de Ácidos Nucleicos en LINFOMA

El sistema CRISPR/Cas9 es la herramienta de edición de genes más poderosa hasta ahora

Tipo de edición: In vivo de células somáticas 

Dirigido hacia:  ARN guía único (ARNsg)

Dirigido por: ARN: CRISPR-Cas9

Vector: Lentivirus basado en plásmidos que expresan sgRNA 

Célula a tratar: Células de Linfoma de Burkitt (células B)

Vía de administración: Parenteral: Intravenosa

RESULTADOS

Costo plazo: El tratamiento inhibe la proliferación de células de linfoma e induce la apoptosis de células infectadas con el virus Epstein-Barr

Mediano plazo: La entrega de CRISPR-Cas9 mediada por lentivirus ha logrado resultados exitosos tanto in vitro y en vivo, para el tratamiento de distintos virus 

Largo plazo:  CRISPR-Cas9 se ha convertido en una herramienta revolucionaria de edición del genoma, se espera que exprese mayor eficacia en terapias antitumorales en células de linfoma

Estrategias para editar genes utilizando el sistema CRISPR/Cas9

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA: 

https://sci-hub.se/https://doi.org/10.1016/j.jconrel.2017.09.012 

sábado, 20 de febrero de 2021

Terapia Regenerativa (Terapia Celular o Terapia con Stem Cells)

Terapia con células CAR-T anti CD19 en LINFOMA

Tipo de Stem Cells: Células CAR-T (células T con receptor de antígeno quimérico) 

Método de obtención:

1. Extracción de sangre del paciente diagnosticado con Linfoma y la posterior separación de linfocitos T de esta muestra 

2. Luego se realiza la trasferencia del gen que codifica para la construcción del antígeno quimérico al genoma del linfocito T (se lo hace por medio de transfección con el uso de vectores virales, como retrovirus o por medio de otros mecanismos como la electroporación)

Vía de administración: Se inyectan al paciente, luego de realizarle una quimioterapia de acondicionamiento.

RESULTADOS: 

A corto plazo: No presentaron cambios en los niveles de estas células ni desarrollaron infecciones que pudieran hacer sospechar su depleción

A mediano plazo: La infiltración exitosa de las células CAR T en los ganglios linfáticos malignos consiguieron una respuesta completa del tratamiento sin la necesidad de una tercera infusión.

A largo plazo: A pesar de que el paciente sufrió una aplasia de células B prolongada a causa de la muerte de todas las células que presentaran el antígeno CD19, no tuvo ninguna toxicidad crónica.



Referencias:

1. http://scielo.sld.cu/pdf/hih/v34n4/a03_923.pdf

2.  https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs11899-018-0476-4


sábado, 13 de febrero de 2021

Transgénicos en LINFOMA

 TEMA: EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTITUMORAL DE CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES QUE SOBREEXPRESAN TRAIL E IFNβ EN UN MODELO MURINO DE LINFOMA

TIPO DE ANIMAL TANSGÉNICO: Ratones de la cepa Balb/c machos de 6 a 8 meses(murinos)

MÉTODO POR EL QUE FUE OBTENIDO: Se tomó 1 ml de células del Linfoma Murino L5178Y por punción peritoneal de un ratón con linfoma ascítico, de forma estéril, se lavaron y centrifugaron 3 veces con 5 ml de Solucion Balanceada de Hanks´s estéril a 1500 rpm. Se concentraron las células de linfoma en una suspensión de 1x107 /ml de Solución Balanceada de Hanks´s estéril y se inocularon 100 µl de la suspensión celular en los ratones en distintos lugares anatómicos tanto subcutáneos (espalda, pierna y el costado) como intramusculares (músculo gastrocnemio y sacrocaudal ventral), para valorar la mejor zona que nos permitiera evaluar el desarrollo del tumor y realizar las pruebas fisiológicas e inmunológicas. Para determinar el estado de inmunosupresión de los ratones; por cada zona se utilizaron 4 ratones.

USO QUE SE LE HA DADO: Para determinar si la Respuesta Inmune de tipo Celular, en este modelo de inmunosupresión por el Linfoma Murino.Este modelo de Linfoma sólido es bueno para estudiar los mecanismos biológicos del desarrollo tumoral y sus interacciones con los sistemas del individuo, además de probar fármacos de interés para valorar sus propiedades inmunoestimuladoras o citotóxicas, así como quimioterapéuticas.

TRANSGÉNICOS

VENTAJAS

1   1. De gran utilidad para fabricar medicamentos en distintas enfermedades.

     2. Los animales transgénicos (ratones) tienen una mayor gamma de nutrientes en su carnes.

     3. Importantes para desarrollar terapias génicas.

     4. La modificación genética de estos animales puede aumentar su resistencia a ciertas enfermedades y plagas.

     5. Los animales transgénicos pueden volverse donadores en potencia en trasplantes de órganos.

DESVENTAJAS

1. Algunos animales no deben ser usados para este tipo de experimentaciones.

2.  La modificación genética en animales puede conllevar a la pérdida de su biodiversidad genética.

3. Los humanos que reciben trasplantes de animales pueden ser susceptibles a enfermedades que solo se dan en estos últimos.

4.  Los animales sufren ciertos tipos de maltrato en este proceso de experimentación.

5. Animales transgénicos al ser sueltos en la naturaleza pueden desarrollar problemas entre sí.


       Referencias bibliográficas:  

     1. http://eprints.uanl.mx/16853/1/1080290391.pdf

   2. https://www.ecorfan.org/bolivia/researchjournals/Ciencias_de_la_Salud/vol4num10/Revista_Ciencias_de_la_Salud_V4_N10_3.pdf



viernes, 5 de febrero de 2021

ADN Recombinante artificial en LINFOMA

T: Clonación del Gen EBER-1 Virus Epstein-Barr y su expresión génica en linfomas 

O:

Determinar la presencia de transcriptos virales en linfomas, conociendo que el virus de Epstein Barr es capaz de inducir transformación, realizando screening de los recombinantes.

G:

Fragmento de ADN de hasta 10 Kb de BamHI C de la cepa B95-8 que contiene el gen EBER-1

ER:

EcoRI

EL:

Ligasa T4 (Sigma)

V:

Plásmido recombinante pBR322, pBSEBER-1  (150pb) (no viral)

CR:

Procariota (E.coli Top 10) Células neoplásicas (eucariota)

MTG:

Transformación y transfección por temperatura de 55° C

MIC:

Cultivo de las células (microbiológicos), Screening de color, hibridación y PCR


Referencia Bibliográfica: 

Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza 

Este se recombina de manera natural por procesos como la infección viral reproducción sexual y la transformación bacteriana. En el caso de las bacterias existen tres mecanismos de recombinación: transformación, conjugación y transducción. (1)

Por ejemplo, los virus como es el caso del Epstein-Barr, transfieren su ADN envuelto en una cubierta con proteínas, entre bacterias, especies de eucariotas o virus, transfieren su material genético durante la infección. Dentro de la célula infectada, los genes se replican y dirigen la síntesis de proteínas virales. (2)

Referencia Bibliográfica: 

1. https://cdn.educ.ar/dinamico/UnidadHtml__get__3115e6c3-7a08-11e1-805a-ed15e3c494af/index.html

2. https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/19-La%20recombinaci%C3%B3n%20gen%C3%A9tica%20en%20procariontes.pdf





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